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Revista Agropecuaria y Forestal APF 3(1): 51-54. 2014
Ensayo de actividad de la ALS
La actividad ALS se midió como la cantidad formada
de acetolactato, después de la conversión de este pro-
ducto en acetoína por descarboxilación en presencia
de ácido (Ray 1984). La extracción de la enzima y los
estudios de la actividad enzimática se realizó sobre ho-
jas jóvenes siguiendo la metodología descrita por Calha
et al
. (2007).
Los ensayos de actividad de la ALS se
realizaron sobre extractos enzimáticos incubados con
Imazamox, y se expresaron como la concentración de
herbicida necesaria para reducir la actividad ALS en un
50% (
I
50
)
con respecto al control.
Resultados y Discusión
Ensayo de dosis-respuesta (ED
50
)
Los datos de peso fresco de los cultivares se ajustaron
al modelo de regresión no lineal log-logistic con un nivel
de significancia (P<0.01), permitiendo estimar las dosis
efectivas que reduce en 50% (ED
50
)
el peso fresco de
los cultivares tratados (Tabla 1 y Figura 1).
La dosis requerida para reducir el peso fresco en un
50%
del cultivar Pantera (ED
50
)
fue de 107.7 g ia ha
-1
(
Tabla 1). Esta dosis es 2.5 veces la recomendada, lo
que muestra alta resistencia. Por el contrario, para Ga-
zul (S) la ED
50
fue de 1.63 g ia ha
-1
,
lo que muestra un
nivel de reducción de masa fresca a dosis muy bajas y
por supuesto la sensibilidad del mismo
El factor de resistencia (FR) del cultivar Pantera fue
66.1,
indicando que este cultivar requiere 66.1 veces la
dosis de cultivar sensible para reducir la masa fresca en
un 50% (Tabla 1).
Ensayo de actividad de la enzima ALS
Los datos para cada uno de los cultivares muestran un
ajuste significativo (P<0,05) a la ecuación log-logístic
(
Tabla 2). Para el cultivar Pantera, la actividad de la en-
zima ALS se redujo con el aumento de la concentra-
ción de Imazamox, mostrando una respuesta sigmoidal
(
Figura 2). La concentración de herbicida que reduce
en 50% la actividad de la enzima (I
50
)
de los cultivares
Pantera y Gazul fue 29.06 y 2.25 µM, y el FR calculado,
obtenido de la relación entre el cultivar resistente y sen-
sible (I
50
R / S I
50
)
fue 12.91 en Pantera (Tabla 2).
Los resultados mostraron correlación entre los valores
de I
50
y la ED
50
,
lo que explica la reducción de la masa
fresca como consecuencia de la inhibición de actividad
enzimática en el cultivar Gazul, ya que esta enzima ca-
taliza la biosíntesis de aminoácidos de cadena ramifica-
da valina, leucina e isoleucina, los cuales son esencia-
les para el crecimiento de la planta.
Conclusiones
Los resultados de la actividad enzimática de la ALS y de
dosis respuesta indican un alto nivel de resistencia en el
cultivar Pantera, cuya correlación sugiere una mutación
en la proteína de enlace con el herbicida.
Tabla 2. Parámetros de la ecuación utilizada
1/
para calcular la concentración de Imazamox que reduce en 50% la
actividad enzimática (I
50
).
Cultivar Respuesta
U
L
b
Pseudo r
2 3/
ED
50
(
SE)
2/
FR
4/
Pantera
R
101.53
14.73
0.48
0.98
29.06(3.65)
12.91
Gazul
S
100.32
5.86
1.09
0.98
2.25 (0.16
------
1/
Ecuación Log-logistic Y = L + {(U-L) / [1 + (x/I
50
)
b
]},
donde Y es la actividad enzimática, expresada como porcentaje con respecto
al control no tratado; x (variable independiente) es la concentración Imazamox (µM), U es el valor máximo de la asíntotas, L es
el valor mínimo, b es el punto de inversión de la curva, e I
50
es la concentración de Imazamox requerida para reducir en 50% la
actividad enzimática de la ALS. Los datos fueron ajustados a un modelo de regresión no lineal.
2/
SE= error estándar.
3/
coeficien-
te de determinación.
4/
FR = factor de resistencia = I
50
R/ I
50
S).
Tabla 1. Parámetros de la ecuacion
1/
usada para calcular la dosis de Imazamox requerida para reducir en un
50%
la masa fresca (ED
50
)
de los cultivares de trigo (R) y (S).
Cultivars Respuesta
U
L
b
Pseudo r
2 3/
ED
50
(
SE)
2/
FR
4/
Pantera
R
98.80
12.21
6.05
0.97
107.70 (2.013)
66.1
Gazul
S
100.00
6.06
2.63
0.99
1.63 (0.103)
------
1/
Ecuación Log-logistic Y = L + {(U-L) / [1 + (x/ED
50
)
b
]},
donde Y es la masa fresca, expresada como porcentaje con respecto al
control no tratado; x (variable independiente) es la dosis del herbicida Imazamox (g ai ha
-1
),
U es el valor máximo de la asíntotas,
L es el valor mínimo, b es el punto de inversión de la curva, y ED
50
es la dosis efectiva requerida para reducir en 50 % la masa
fresca de los cultivares. Los datos fueron ajustados a un modelo de regresión no lineal. Los datos representan el promedio de
diez repeticiones.
2/
SE= error estándar.
3/
coeficiente de determinación.
4/
FR = factor de resistencia = ED
50
R/ ED
50
S).
