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Revista APF 3(2) 2014
A nivel de cada lote de cacao de exportación se tomaron
360
submuestras de 80 g. Estas submuestras se mez-
claron y se tomó una muestra final de 1 kg. Al momento
del muestreo, se registró la humedad de cada muestra,
tipo de cacao, procedencia, tiempo de almacenamiento
y exportador. Las muestras fueron conservadas a una
humedad entre 7 a 7.5 % en la Estación Experimental
Mata Larga del Instituto Dominicano de Investigaciones
Agropecuarias y Forestales (IDIAF) en San Francisco
de Macorís.
Las variables a medir fueron: nivel de OTA (ppb), tipo y
número de defectos (% de moho e insectos). La deter-
minación de los Niveles de OTA se realizó utilizando el
protocolo del Cirad, Guyot (2004).
Los defectos del cacao se determinaron mediante con-
teo y clasificación de los granos por tipo de defectos,
para lo cual se utilizó las normas del laboratorio ISO
1401.
Se tomó una muestra de 200 granos. Se realizó
un análisis de correlación entre los defectos del grano y
los niveles de OTA encontrados por lote exportado.
El nivel de OTA se determinó en los laboratorios del
Cirad-Francia. Para el análisis de cromatografía líquida
de alta resolución (HPLC) se utilizaron 100 g de cacao.
Las muestras fueron acondicionadas, colocándolas en
un congelador a -80
0
C y posteriormente molidas en un
molino Perten LM 3600.
El protocolo utilizado para la extracción, purificación,
determinación y cuantificación del nivel de OTA fue el
siguiente:
Fase de extracción:
se pesaron 50 g de cacao mo-
lido, se le adicionaron 4 g de NaCl y 200 ml de una
solución compuesta de acetronitrilo y agua destilada en
proporción 60/40. Luego se colocó en agitación por 30
minutos.
Del extracto, se tomó 45 ml y se colocó en una centrifu-
ga Sigma 2k15 por 10 minutos a 3,000 rpm a 10
o
C.
Fase de purificación:
se diluyó 4 ml del extracto en
44
ml de fosfato búfer salino (PBS) más 4 µl de Tween
20.
Las columnas fueron colocadas en una cámara de
vacío, se le removieron las tapas y se le agregó 10 ml
de PBS para acondicionarlas. A continuación, se pasó el
extracto diluido a un flujo de 2-3 ml/min. Al terminarse el
extracto diluido las columnas fueron lavadas con 20 ml
de PBS a un flujo de 5 ml/min y secadas dejando pasar
aire dentro de las mismas.
Debajo de cada columna se colocó un recipiente reco-
lector. Posteriormente, se disocia la OTA de la columna
utilizando 1.5 ml de una solución de desorsión (meta-
nol). El extracto purificado es evaporado en un calenta-
dor a 70
0
C con un flujo constante de nitrógeno, luego
se le agrega 1 ml de solvente de la fase móvil del HPLC.
Finalmente, las muestras son inyectadas al equipo de
HPLC para su detección y cuantificación.
Empresa
Exportadora
Tipo de Cacao
Sánchez
Convencional
Sánchez
Orgánico
Hispaniola
Convencional
Hispaniola
Orgánico
Total
1
9
18
6
27
60
2
7
0
0
18
25
3
5
0
0
0
5
4
3
0
0
0
3
5
5
0
0
2
7
6
1
2
1
14
18
7
7
0
0
0
7
8
0
0
0
4
4
9
0
1
0
8
9
10
0
0
0
6
6
11
0
0
0
1
1
12
0
0
0
2
2
13
0
0
0
3
3
14
0
0
0
10
10
15
0
0
0
10
10
16
1
1
1
1
4
Total
38
22
8
106
174
Tabla 1. Número de muestras tomadas por tipo de cacao y exportador
